修飾ASP-N蛋白內(nèi)切酶（莓實(shí)假胞菌，突變體
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產(chǎn)品型號：EN-171，2pcs
產(chǎn)品代碼：
產(chǎn)品價(jià)格：
折 扣 率： 0
最后更新：2017-06-12
關(guān) 注 度：2866
生產(chǎn)企業(yè)：深圳市國泰宜豐科技有限公司
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產(chǎn)品詳細(xì)介紹 修飾ASP-N蛋白內(nèi)切酶（莓實(shí)假胞菌，突變體）ASPARTIC-N
獨(dú)特的修飾方法
1 最小自分解產(chǎn)物
（在pH8.0，30°C條件下的自分解小于5%）
2 改善酶的穩(wěn)定性
活力保持：
在30 C, pH 8.0 條件下孵育6小時(shí)，仍保持80-90%活力
在30 C, pH 8.0 條件下孵育24小時(shí)，仍保持65-75%活力
Princeton Separations提供測序級修飾Asp-N：
3 在各批次重復(fù)性消化反應(yīng)中，酶活力水平保持一致
4 高特異性，不受其它已知肽鏈內(nèi)切酶的影響
5 每一包裝帶有分析證書以保證質(zhì)量
6 低水平的自分解防止靶肽模糊不清
7 24小時(shí)的穩(wěn)定性支持高性能電子噴霧ElectroSpray、微量噴霧MicroSpray、Nanolock噴霧NanoLockSpray等操作的晝夜連續(xù)進(jìn)行。
Princeton Separations公司測序級肽鏈內(nèi)切酶是高度純化的酶，通過化學(xué)修飾，降低了酶的自裂解，增加了酶的穩(wěn)定性。由于在超長的消化期間酶持續(xù)保持活性，因此可以極好地控制蛋白裂解反應(yīng)。
特性
Asp-N內(nèi)切蛋白酶是一種金屬酶，從脆假單胞菌的一個(gè)突變種中提出。該酶特異性地水解天冬氨酸和半胱磺酸N-末端的肽鍵，最佳活性反應(yīng)條件在pH6.5-8.0。其分子量為27KD 。
化學(xué)修飾
Princeton Separations測序級Asp-N經(jīng)過充分地純化，去除污染的蛋白酶，避免影響消化的特異性。使用Princeton Separations開發(fā)的一種方法將高純度酶制品進(jìn)行化學(xué)修飾。這種修飾使酶呈現(xiàn)出自分解抗性和穩(wěn)定的酶活性。該修飾酶在30°C反應(yīng)緩沖液中孵育6小時(shí)，其活性仍保持至少80-90%的酶活性，在同樣條件下孵育24小時(shí)，仍保持65-75%的活性。蛋白和酶以1:100比率進(jìn)行過夜消化反應(yīng)，可以完全裂解絕大多數(shù)的蛋白。
質(zhì)量控制
以酪蛋白為底物所進(jìn)行的蛋白消化反應(yīng)用來檢測修飾酶的蛋白酶活性。修飾酶蛋白酶活性通常與Trypsin的蛋白酶活性進(jìn)行比較。
制備
每只小瓶裝有修飾Asp-N內(nèi)切蛋白酶干粉3μg，用60μl去離子水或是你所選用的緩沖液溶解，使蛋白酶濃度為0.05μg/μl。
應(yīng)用
對于蛋白裂解，將酶與蛋白以1：50或1：100比值溶于標(biāo)準(zhǔn)的消化緩沖液（如：50mM Tris-cl，pH8.0；或是50mM磷酸鈉，pH8.0；或是50mM碳酸氫胺）中，25 – 30°C 孵育2-6小時(shí)，如果需要，可延長到24小時(shí)。過夜孵育以1：100比值為佳，此反應(yīng)條件適合于大多數(shù)蛋白。
儲存
未開包裝儲存于2 – 8°C，去離子水溶解之后，可在-10°C to -20°C儲存3個(gè)月 在變性劑尿素中的穩(wěn)定性 如果蛋白難于溶解，在消化步驟開始之前，可以在消化液中加入尿素。下面表格中所例舉的數(shù)據(jù)，表明變性劑尿素對修飾Asp-N內(nèi)切蛋白酶酶活性的影響。
尿素濃度 活性控制（%）
無 100%
1.0M 100%
2.0M 100%
4.0M 100%
因?yàn)辂}酸胍嚴(yán)重抑制Asp-N的活性，所以不能用其溶解蛋白。
訂貨信息：
產(chǎn)品目錄
產(chǎn)品說明
EN-171
Aspartic-N 2 x 5 ug vials
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| 會(huì)員級別：免費(fèi)會(huì)員 |
| 加入時(shí)間：2017-01-11
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